紫外分光光度計(jì)在制藥行業(yè)中的應(yīng)用

藥品是關(guān)乎人類健康的特殊產(chǎn)品，藥品的生產(chǎn)過程，從原料、生產(chǎn)過程、設(shè)備、軟件到人員操作都有著明確的規(guī)范管理。安全、有效、可控六個(gè)字是評(píng)價(jià)藥品好壞的唯一標(biāo)準(zhǔn)。

為保證藥品生產(chǎn)處于符合藥品質(zhì)量的要求，現(xiàn)代藥品在整個(gè)中間體及成品的生產(chǎn)過程中，都要受到各種方法的檢測(cè)和監(jiān)控，高效液相色譜儀、氣相色譜儀、紫外分光光度計(jì)等是制藥生產(chǎn)中常用的檢測(cè)儀器。其中，紫外分光光度計(jì)由于準(zhǔn)確度高、測(cè)定限度低、設(shè)備簡便、儀器成本低、易于操作等優(yōu)點(diǎn)，已成為制藥生產(chǎn)中必備的檢測(cè)設(shè)備之一。

紫外分光光度法是通過測(cè)定物質(zhì)在某些特定波長處或一定范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，定性和定量對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分析的方法，其理論基礎(chǔ)為朗伯-比耳定律，溶液的吸光度與吸光物質(zhì)含量、液層厚度乘積成正比。對(duì)于一般的紫外分光光度法，其測(cè)量的相對(duì)誤差在1%~3%。隨著大量新的顯色劑的合成及應(yīng)用，尤其是有關(guān)多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究，推進(jìn)了元素測(cè)定的靈敏度的大幅提高。采用預(yù)富集和示差法，適用質(zhì)量分?jǐn)?shù)從常量（1%~ 50%)到痕量（10-1°~10-8)。在各國藥典中，藥品的理化常數(shù)、鑒別、檢査和含量測(cè)定等各個(gè)項(xiàng)目中，都能見到紫外分光光度法的應(yīng)用實(shí)例。

目前利用紫外分光光度計(jì)分析的藥物品種有維生素、抗生素、解熱藥、去痛藥、降血壓藥、安定藥、鎮(zhèn)咳藥、滴眼藥、磺胺類藥、利尿藥、某些婦科藥、痢疾藥、腹瀉藥、抗腫瘤藥、抗結(jié)核藥等。

在藥典和藥品標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用紫外分光光度法的項(xiàng)目有吸收系數(shù)、鑒別、顏色檢査、純度檢査、溶出度、含量均勻度檢査和含量測(cè)定等。在制藥生產(chǎn)中，紫外分光光度法應(yīng)用最多的是藥物含量的測(cè)定、藥物雜質(zhì)檢測(cè)、藥物穩(wěn)定性考察、釋放度、藥物負(fù)載行為測(cè)定及物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定等方面。

1．藥物含量測(cè)定

藥品的含量是評(píng)定藥品的主要指標(biāo)之一，在設(shè)計(jì)其測(cè)定方法時(shí)，含量測(cè)定方法的選擇要著眼于準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性。紫外分光光度計(jì)操作簡單、具有較高的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，現(xiàn)可以直接用于藥品含量的檢測(cè)。目前紫外分光光度計(jì)檢測(cè)較多的藥物劑型包括片劑、膏劑、注射劑等。

1.1 片（滴丸)劑中含量測(cè)定

紫外分光光度法測(cè)固體制劑中藥品含量，需制備已知含量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液，測(cè)定最大吸光度處波長；然后以含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；取已配制好樣品溶液適量，置于石英比色皿中，在最大吸光度波長處測(cè)定溶液吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的含量。

蓋柯等用紫外分光光度法在297nm處，測(cè)定了小劑量阿司匹林腸溶片的含量。2013年，郭錦明等人在原有的阿司匹林溶出乙酰水楊酸含量測(cè)定的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，將測(cè)試波長從可見光區(qū)遷移到紫外光區(qū)，改進(jìn)后的方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，并將此方法運(yùn)用在藥劑實(shí)驗(yàn)教學(xué)。

如果有些片劑藥物沒有強(qiáng)的生色基團(tuán)，沒有紫外吸收或是吸收很弱，不能用紫外分光法檢測(cè)器直接檢測(cè)的情況下，可以通過將其與生色基團(tuán)衍生，生成有紫外吸收的衍生物來檢測(cè)其的含量。1993年，Drazen等人利用阿侖膦酸鈉易與金屬鰲合的性質(zhì)，建立了阿侖膦酸鈉與Cu2+鰲合形成具有紫外吸收的衍生物，從而可用普通的紫外分光光度計(jì)檢測(cè)阿侖膦酸鈉的含量。在此基礎(chǔ)上，2000年，Kuljan in 等人通過將阿侖膦酸鈉與Fe3+絡(luò)合，用紫外分光光度法測(cè)定了阿侖膦酸鈉的含量，可檢測(cè)質(zhì)量濃度2 |xg/mL 的量。

利用同樣的原理，通過鋁敏化紫外分光光度法，在pH=6.30的緩沖溶液中測(cè)定片劑中依諾沙星含量，可檢測(cè)的濃度在0.4~37.5 |xmol ? L-1，檢出限為 0.125|xmol ? L-1，此方法測(cè)定依諾沙星片劑的含量靈敏、簡便、快速、準(zhǔn)確[。另外，2008年，Walash等人利 用Cu2+和利塞膦酸鈉鰲合，形成具有紫外吸收的衍生物，簡單、快速、精確地測(cè)定出了利塞膦酸鈉的含量，該方法的檢測(cè)范圍是2~40 |xg/mL，檢測(cè)最低限度是 0.03|xg/mL。

1.2注射劑含量測(cè)定

紫外分光光度法測(cè)液體制劑中藥品含量除不需要溶解外，其他的步驟和固體制劑大致相同，即測(cè)定波長的確定、線性關(guān)系試驗(yàn)、精密度測(cè)定、回收實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)、樣品測(cè)定。

2004年王雷等建立了頭孢哌酮注射劑含量的紫外分光光度法測(cè)定方法，確定了測(cè)定波長為228.4 nm;頭孢哌酮在質(zhì)量濃度2.5~40.0|xg/mL內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系（R =0.9999)，平均回收率為99.6%。王建新探討了谷氨酸洛美沙星注射劑的含量的方法。確定測(cè)定波長為286 nm，回歸方程為4 = [0.07137p/(|xg.mL-1)]-0.002 4(R =0.999 9)，在 2.5~ 12.5 |xg/mL內(nèi)，谷氨酸洛美沙星的吸光度與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好，平均回收率為100.32%，RSD為 0.23%。張慧輝等人還建立了恩諾沙星納米乳紫外分光光度法測(cè)定藥物含量的方法。該方法的精密度、回收率、穩(wěn)定性和重復(fù)性均符合要求，可作為恩諾沙星納米乳中間產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制方法。

1.3凝膠（乳膏）劑含量測(cè)定

凝膠（乳膏）劑屬于半固體制劑，其含量的測(cè)定具有一定的難度。但一些研究也建立了紫外分光光度法測(cè)含量的方法。紫外分光光度法測(cè)半固體制劑中藥品含量的過程一般為，先選擇測(cè)定波長，陰性干擾試驗(yàn)，對(duì)除主藥外的其他成分制成陰性對(duì)照品進(jìn)行線性關(guān)系考察，得回歸方程，加樣回收試驗(yàn)，計(jì)算回收率。

利用此方法，陳斌等人測(cè)定了復(fù)方諾氟沙星軟膏中諾氟沙星的含量，表明回收率高，結(jié)果準(zhǔn)確。 2006年，吳渝陵等人建立了水楊酸軟膏劑含量的紫外分光光度測(cè)定方法，可在質(zhì)量濃度4~28 |xg/mL準(zhǔn) 確地測(cè)定軟膏中水楊酸的含量。此外，對(duì)于廣泛應(yīng)用飛蘆薈軟膏中主要成分，蘆薈多糖含量的測(cè)定，紫外分光光度法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)，是非常有效的方法。

2．藥物穩(wěn)定性考查

藥物制劑穩(wěn)定性是指藥物制劑從制備到使用期間質(zhì)量發(fā)生變化的速度和程度，是評(píng)價(jià)藥物制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，是藥品安全有效的重要基礎(chǔ)研究內(nèi)容，也是藥品制劑技術(shù)創(chuàng)新的重要領(lǐng)域之一。

氨舒鈉和優(yōu)力新均為氨芐西林舒巴坦（SBT)復(fù)方制劑，為比較其對(duì)13-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性，并檢測(cè)SBT對(duì)y8-內(nèi)酰胺酶的抑制作用。雷軍東等人采用紫外分光光度法測(cè)定酶對(duì)抗生素的水解率，并計(jì)算了 SBT的抑酶率。結(jié)果顯示，氨舒鈉和優(yōu)力新的水解速率無顯著差異，在一定的范圍內(nèi)SBT的抑酶作用強(qiáng)度與劑量呈相關(guān)性。

鄧代全等人使用紫外分光光度計(jì)，通過測(cè)定腫節(jié)風(fēng)注射液與16種藥物配伍后紫外吸收變化，研究腫節(jié)風(fēng)注射液與臨床常用16種藥物配伍的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，腫節(jié)風(fēng)注射液與酚磺乙胺、三氮唑核苷、 青霉素、甲硝唑應(yīng)謹(jǐn)慎配伍，與VC、VB6、氯化鉀、腺嘌昤核苷三磷酸(ATP)、輔酶A、西米替丁、地塞米 松、慶大霉素、丁安卡那霉素、環(huán)丙沙星等臨床可以配伍應(yīng)用[19]。

葉苗等人使用分光光度計(jì)，通過測(cè)定人血白蛋白（HSA)與結(jié)合后樣品的吸光度研究了不同工藝人血白蛋白與結(jié)合功能。結(jié)果顯示，HSA 與的結(jié)合率最高為98.18%，最低為97.47%, 不同生產(chǎn)工藝制備的樣品比較顯示，HSA與的結(jié)合功能差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3．藥物雜質(zhì)檢測(cè)

雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對(duì)人健康有害的物質(zhì)。利用藥物與雜質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收性質(zhì)的差異，若藥物在雜質(zhì)的最大吸收波長處沒有吸收，則可在此波長處測(cè)樣品溶液的吸收度，通過控制樣品溶液吸收度來控制雜質(zhì)的量。

李華龍、米亞嫻根據(jù)5-羥甲基糠醛對(duì)284 nm 波長的入射波有最大吸收，利用紫外分光光度法測(cè)定復(fù)方電解質(zhì)葡萄糖注射液中雜質(zhì)5-羥甲基糠醛 的含量。結(jié)果顯示，吸光度與5-羥甲基糠醛的濃度呈良好的線性關(guān)系，因此可用該方法靈敏、簡便、準(zhǔn)確，測(cè)定復(fù)方電解質(zhì)葡萄糖注射液（MG3、M3A、 M3B、R2A、R4A)的含量，實(shí)現(xiàn)對(duì)其的質(zhì)量控制。

4．藥物釋放度測(cè)定、藥物負(fù)載行為

藥物釋放度是評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量的內(nèi)在指標(biāo)，是制劑質(zhì)量控制的重要手段。釋放度是隨著科學(xué)技術(shù)和生物藥劑學(xué)的發(fā)展而迅速發(fā)展起來的一種新的藥品的檢測(cè)方法。

王彥、韓升艷等人利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定了不同廠家左氧氟沙星片在不同時(shí)刻的溶出度，結(jié)果顯示，5個(gè)藥廠生產(chǎn)的左氧氟沙星片的體外溶出度均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，但A廠藥品釋放平穩(wěn)，E廠溶出較快，A廠樣品相對(duì)穩(wěn)定，生產(chǎn)工藝優(yōu)于其他廠家。

楊向陽以鹽酸度洛西汀為對(duì)照品，以0.1 mol/L 的酸溶液為釋放介質(zhì)，旋轉(zhuǎn)，然后將腸溶片浸入到預(yù)熱的pH=6.8的磷酸鹽緩沖液釋放介質(zhì)中，最后采用紫外-可見分光光度法，測(cè)定其在230 nm波長處的吸光度，獲得了腸溶片鹽酸度洛西汀的釋放度。

田智慧等人制備5-氟尿嘧啶/納米蒙脫土緩釋系統(tǒng)，采用紫外分光光度計(jì)定量分析藥物的體外累積釋藥量，證明了 5-氟尿嘧啶/納米蒙脫土緩釋系統(tǒng)有良好的緩釋效果。

喬艷麗等人按照稀釋度測(cè)定法，采用照紫外- 可見分光光度法，以苯扎貝特對(duì)照品，通過測(cè)定波長228 nm的吸光度，測(cè)定了苯扎貝特緩釋片的釋放度。

慎愛民等人通過紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)了諾氟沙星柱撐水滑石體外釋放效果，結(jié)果表明，水滑 石是很好的藥物載體。2012年，徐愛仁等人使用 紫外分光光度計(jì)，研究了阿霉素的負(fù)載行為，結(jié)果顯示介孔二氧化硅納米粒具有較高的藥物載藥量。

5．物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定

不同物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)的特征吸收峰不同，所以紫外分光光度法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)的測(cè)定。這在藥物分析上具有很高的應(yīng)用價(jià)值，很多的藥物紫外吸收光譜已被列入到了國內(nèi)外的藥典中，為藥物分析提供了很好的手段。

楊向陽在對(duì)合成藥物鹽酸度洛西汀進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證的過程中采用了利用紫外分光光度法，紫外吸收光譜表明結(jié)構(gòu)中存在不飽和芳香共軛結(jié)構(gòu)，有芳環(huán)存在，對(duì)度洛西汀分子結(jié)構(gòu)中存在的唾吩環(huán)和蔡環(huán)是—個(gè)合理解釋ra。

6．結(jié)語

總而言之，紫外可見分光光度計(jì)具有快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，使其在藥物生產(chǎn)監(jiān)測(cè)領(lǐng)域得到了深入的發(fā)展和應(yīng)用。隨著各種新型儀器及現(xiàn)代化技術(shù)的發(fā)展，紫外分光光度計(jì)也將朝著集更微量、更靈敏的尖端技術(shù)方向發(fā)展，屆時(shí)，其在藥品生產(chǎn)監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用也會(huì)越來越廣泛。