多元化檢測技術(shù)助力液體活檢ctDNA臨床應(yīng)用

    傳統(tǒng)的組織活檢，因其局限性，如腫瘤的異質(zhì)性、腫瘤患者無法進行手術(shù)、某些腫瘤解剖位置不便進行穿刺及穿刺自身的臨床風(fēng)險等，可能導(dǎo)致患者無法獲得針對性治療；液體活檢(Liquidbiopsy)作為組織活檢的補充，通過非侵入性取樣降低活檢危害，在動態(tài)監(jiān)測腫瘤進展和治療反應(yīng)等領(lǐng)域獲得臨床認(rèn)可，已成為腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)療領(lǐng)域炙手可熱的明星技術(shù)。上個月底美國醫(yī)療保險機構(gòu)Palmetto宣布將體細(xì)胞變異ctDNA分析測試納入其保險范圍，可見液體活檢（ctDNA檢測）的臨床價值已獲得醫(yī)保機構(gòu)的認(rèn)可，并有望在臨床推廣。
　　
　液體活檢的檢測對象主要有CTC、ctDNA、循環(huán)microRNA和Exsome（外泌體），其中，ctDNA可應(yīng)用于腫瘤的早期診斷、動態(tài)監(jiān)測腫瘤的發(fā)生發(fā)展及療效、耐藥檢測、復(fù)發(fā)風(fēng)險評估等，在腫瘤診治中前景廣闊，受到越來越多的關(guān)注。
　　
　ctDNA是由腫瘤細(xì)胞釋放到血漿中的單鏈或者雙鏈DNA，攜帶有與原發(fā)腫瘤組織相一致的分子遺傳學(xué)改變。是一種特征性的腫瘤生物標(biāo)記物，并且可以被定性、定量和追蹤。但由于ctDNA含量低（<1.0%總cfDNA），片段短（180-200bp），半衰期短（~2小時），故其檢測對痕量核酸檢測技術(shù)提出全新的挑戰(zhàn)。

　液體活檢能否真正落實到臨床應(yīng)用，有賴于檢測技術(shù)的臨床普及。目前具備極微量核酸基因突變檢測能力的技術(shù)主要有ARMS技術(shù)（包括Super-ARMS）、第二代測序（NGS）和數(shù)字PCR（ddPCR，包括BEAMing技術(shù)），這些技術(shù)也是近期液體活檢專家共識中推薦的檢測技術(shù)。
　　
　ARMS技術(shù)是目前歐盟及中國CFDA批準(zhǔn)用于臨床的血液檢測方法，更是血液EGFR突變檢測專家共識推薦的技術(shù)。ARMS技術(shù)具有簡便快速，特異性好，技術(shù)普及度高等特點，非常適合醫(yī)院廣泛開展。作為腫瘤液體活檢臨床上唯一獲得法規(guī)支持的檢測技術(shù)，EGFR突變血液檢測產(chǎn)品（采用ADx-ARMS法）已廣泛應(yīng)用于臨床診斷，讓越來越多的患者受益。同時，ARMS技術(shù)自身也在不斷升級改造，Super-ARMS是ARMS技術(shù)的升級版，敏感度進一步提高。隨著相關(guān)檢測試劑盒的開發(fā)和產(chǎn)業(yè)化，未來有望成為普及性的臨床血液檢測方法。
　　
　NGS技術(shù)可檢測未知突變且檢測基因數(shù)量不受限，在檢測靈敏度方面亦有潛力可以挖掘，在腫瘤耐藥突變的監(jiān)測與研究等領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。然而，NGS建庫技術(shù)復(fù)雜，常規(guī)建庫測序方法使得血漿中含量極低的腫瘤信號完全淹沒在背景噪聲中，建庫過程原始信息丟失嚴(yán)重或成為敏感度潛力發(fā)揮的限制因素。同時，由于NGS技術(shù)專業(yè)要求高、檢測流程及信息解讀標(biāo)準(zhǔn)化、檢測時間過長、費用過高等限制了其臨床應(yīng)用。因此，NGS技術(shù)要實現(xiàn)在液體活檢中的臨床應(yīng)用，還有許多問題亟待解決。
　 數(shù)字PCR技術(shù)，具有極高的敏感性，可絕對定量；但該方法檢測通量較低，且不能檢測融合變異，目前應(yīng)用此技術(shù)進行ctDNA檢測的試劑盒尚待開發(fā)中。值得一提的是，作為檢測已知基因變異位點的檢測技術(shù)，數(shù)字PCR技術(shù)與Super-ARMS技術(shù)具有高度的檢測一致性，且檢測靈敏度相當(dāng)，從臨床普及性上來看，Super-ARMS更適合于臨床應(yīng)用推廣。
 　液體活檢還處于行業(yè)發(fā)展的早期，還有一些問題亟待解決，如提高檢測技術(shù)的靈敏度和特異性、血液采集系統(tǒng)和分析步驟等的標(biāo)準(zhǔn)化等。液體活檢已獲得臨床醫(yī)生的廣泛認(rèn)可，新的技術(shù)、方法和應(yīng)用都在快速涌現(xiàn)。隨著未來越來越多ctDNA檢測技術(shù)的介入，檢測的終端價格有望降低，這將有利于液體活檢的臨床推廣，加速腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)療的醫(yī)學(xué)革命進程，惠及更多患者。