解決方案丨高效液相色譜儀基線問題處理方法

高效液相色譜儀適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中針對(duì)這種精密而又運(yùn)用廣泛的科學(xué)儀器，昨天我們講解了其常見的柱壓?jiǎn)栴}及解決方法，今天我們來聊一聊基線。HPLC常見的基線問題主要有基線漂移以及基線噪音。
 

　　基線漂移
 

　　線漂移基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問題。一般說來，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí)，基線容易漂移，大概要30min的平衡時(shí)間，如果用了緩沖溶液、緩沖鹽，或者在低波長(zhǎng)下(220nm)平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng)，仍然發(fā)現(xiàn)基線漂移，原因可能有以下幾種：
 

　　1、柱溫波動(dòng)
 

　　控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱。
 

　　2、流通池被污染或有氣體
 

　　用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(盡量斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
 

　　3、紫外燈能量不足
 

　　更換新的紫外燈
 

　　4、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。 檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。
 

　　基線噪音
 

　　對(duì)于紫外檢測(cè)器, 氘燈光源打開后要預(yù)熱30 min以上, 基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測(cè)物無關(guān)的檢測(cè)器輸出信號(hào)的隨機(jī)擾動(dòng)變化, 分短期噪聲和長(zhǎng)期噪聲兩種。
 

　　基線噪音(規(guī)則的)
 

　　產(chǎn)生基線噪音的原因有：在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣;漏液;流動(dòng)相混合不完全;溫度影響(柱溫過高,檢測(cè)器未加熱);在同一條線上有其他電子設(shè)備;泵振動(dòng)。
 

　　了避免基線噪音,在正式進(jìn)樣之前,需要對(duì)流動(dòng)相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動(dòng);泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動(dòng)使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設(shè)備時(shí)斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正;泵振動(dòng)時(shí)在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。
 

　　基線噪音(不規(guī)則的)
 

　　(1) 漏液：檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。
 

　　(2) 流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動(dòng)相的組成。
 

　　(3) 流動(dòng)相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動(dòng)相。
 

　　(4) 檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源,檢查并更正。
 

　　(5) 系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng);檢測(cè)器內(nèi)有氣泡,清洗檢測(cè)器,在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器。
 

　　(6) 流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音) :用硝酸清洗流通池;
 

　　(7) 檢測(cè)器燈能量時(shí)不足更換燈;
 

　　(8) 色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。
 

　　(9) 流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),不建議使用泵的混合裝置。