ELISA試劑盒如何做好標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

 若要給美好人生一個(gè)定義，那就是愜意。若要給愜意一個(gè)定義，那就是三五知己、談笑風(fēng)生。若要給上海雅吉生物公司一個(gè)定義，那就是科研朋友們的買(mǎi)ELISA試劑盒的不二選擇。

  周老師是蘇州大學(xué)在校研究生，老師在我司買(mǎi)了相應(yīng)的抗體自己包被ELISA試劑盒。也是剛剛接觸ELISA實(shí)驗(yàn)的新手，研究大鼠白介素相關(guān)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)，做完大鼠白介素5ELISA實(shí)驗(yàn)后反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的梯度都不好。剛加完顯色劑的時(shí)候梯度還算明顯，但是顯色比較淺，隨著時(shí)間延長(zhǎng)（大概6、7分鐘）以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測(cè)得的值梯度就沒(méi)有了。特咨詢(xún)我司技術(shù)幫忙分析原因所在。我司技術(shù)分析：

1、剛加完顯色劑時(shí)梯度明顯：顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。
2、酶濃度太高，導(dǎo)致最后顯色結(jié)果都是高的
3、包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng)，或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠，
4、樣本中有能夠催化底物的物質(zhì)，沒(méi)洗下來(lái)。
5、建議：包被、酶標(biāo)重新做梯度，先用較低的濃度把梯度摸索好，然后再優(yōu)化靈敏度，最后調(diào)出所需的靈敏度、線(xiàn)性范圍

6、有條件的話(huà)，可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上，加完底物三分鐘讀數(shù)。

7、蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話(huà)，顯色十分鐘就差不多了。
8、酶是自己標(biāo)的這種情況的，HRP比例不要太高。
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