純化抗原的鑒定方法較多,常用的有聚丙烯酰胺凝膠電泳法、結(jié)晶法、免疫電泳法、免疫雙擴(kuò)散法等。事實(shí)上,僅用一種方法還無法作純度鑒定,只有幾種方法聯(lián)合應(yīng)用才較可靠。結(jié)晶法不是純度的標(biāo)準(zhǔn),因結(jié)晶中往往含有其它成分。電泳譜中呈現(xiàn)單一區(qū)帶也不能排除在這條帶中含有其他成分。有時(shí)雖出現(xiàn)幾條帶,也可能是同一物質(zhì)的聚合體或降解物。為獲得好的免疫效果,抗原純化后應(yīng)進(jìn)行鑒定才能用于動(dòng)物免疫,抗原的鑒定主要包括以下幾個(gè)方面:
1、含量檢測(cè)
蛋白含量的測(cè)定zui準(zhǔn)確的方法是凱氏定氮法,但由于要求有精密設(shè)備,故不適合一般實(shí)驗(yàn)室。一般實(shí)驗(yàn)室均采用分光光度計(jì)測(cè)量法。該法首先測(cè)定280nm和260nm的吸光度(A),再用經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算蛋白含量。
蛋白含量(mg/ml)=A280×1.45-A260×0.74。
另外蛋白含量也可采用福林酚法,具體操作見臨床生化技術(shù)。
2、分子量的鑒定
測(cè)定分子量一般采用SDS-PAGE電泳法,詳見臨床生化技術(shù)。
3、純度鑒定
常采用區(qū)帶電泳法鑒定,詳見臨床生化技術(shù)。
4、免疫活性鑒定
常采用雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。
標(biāo)簽:
相關(guān)技術(shù)